谁设计、制造了新冠病毒（四）北卡肺研究所与ENaC

苦难与荣耀

在谎言肆虐、不辨是非真伪的时代，摆证据、讲事实是没有市场的。

新冠病毒的来源真相，新冠疫情的发生真相不应是小圈子里的秘密。

接续：谁设计、制造了新冠病毒（四）欲盖弥彰 2
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回归第四组证据本身。

新冠S蛋白与人类ENaC-α的结构巧合

早前的
谁设计、制造了新冠病毒（四）第四组证据概要
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一文指出：
新冠病毒S蛋白与人类ENaC-α具有相同的长FCS序列，新冠病毒S蛋白S1亚基、S2亚基交界处（S1/S2处）的长furin切割序列，人类ENaC-α的长furin切割序列皆为RRAR'SVAS。

FCS：Furin Cleavage Site，furin（弗林）切割位点；
ENaC-α ：上皮钠离子通道的α亚基；
RRARSVAS：一个八氨基酸序列，序列中氨基酸的中文名依次为，精氨酸-精氨酸-丙氨酸-精氨酸-丝氨酸-缬氨酸-丙氨酸-丝氨酸。

RRAR'SVAS中间所加符号“'”表示furin蛋白酶的切割位置，在新冠病毒中，它也代表S蛋白（Spike蛋白，刺突蛋白）S1亚基、S2亚基的分界线。“'”符号前的四个氨基酸RRAR是新冠病毒的基本furin切割序列（或称最小furin切割序列），它们是S1亚基的最后四个氨基酸（SVAS是S2亚基的起始四个氨基酸）。

在新冠病毒中，RRAR‘SVAS是S蛋白aa（amino acid，氨基酸）序列的第683-690氨基酸（残基），在人类ENaC-α中，它是aa序列的第201-208氨基酸（残基），如下图所示：


图a：新冠、三种新冠“近亲”S1/S2附近的aa序列对照。
图b：新冠S蛋白、人类ENaC-α、小鼠ENaC-α的长furin切割序列对照。

（一个与文章主旨无关的次要说明：小鼠-Mouse ENaC-α的长furin切割序列RSAR‘SASS可能应为Mouse ENaC-α的第228~235氨基酸，而不是上图所示的第238~245氨基酸。）

ENaC是Epithelial Na+ Channel（上皮钠离子通道）的缩写，也叫做Epithelial Sodium Channel （上皮钠通道）。ENaC分布于人类及脊椎动物的肺（肺泡）、呼吸道（鼻腔、气管、支气管）、口腔（舌角质形成细胞）、肾脏、结肠、胰腺、汗腺、唾液腺等众多器官、结构的上皮组织中。一些ENaC高丰度分布的部位，如鼻腔上皮、上下呼吸道上皮、肺泡上皮，恰恰也是新冠病毒的首要感染部位；另有研究（主要论文依据一）发现，ENaC与ACE2受体在人体内的分布部位高度重合。

ENaC包含三个拓扑结构相似的亚基（亚结构）α、β 、γ，一个ENaC单元由两个α亚基、一个β亚基和一个γ亚基构成。ENaC-α表示ENaC的α亚基，它有时也表示为α-ENaC或ENaC-alpha。

ENaC负责调节机体钠吸收，调节上皮组织表面液量，调节器官、组织的盐水平衡，调节血压等基本生理机能。ENaC变异或机能紊乱、失常可能引发各种症状，如：高血压，低血钾，肾脏水、钠潴留、代谢性碱中毒、气道表面液体体积消耗（耗竭）、粘液阻塞、纤毛清除力差、杯状细胞化生、中性粒细胞炎症等等；Liddle综合征、I型假性醛固酮减少症、（肺、呼吸道、肠道、胰脏、肝脏、肾脏、唾液腺、生殖道上皮组织的）囊性纤维化都是ENaC变异或机能异常引发的疾病。

与人类ENaC-α的长furin切割序列“巧合”使新冠S蛋白得以在细胞表面冒充、利用、竞争、劫持人类ENaC-α的水解、激活机能（ENaC需要在furin等蛋白酶作用下水解切割其α和γ亚基以激活其功能），使人体细胞、人体蛋白酶将病毒结构视为人体结构，有效提升了新冠病毒的感染效率和致病能力；与人体ENaC竞争furin蛋白酶，或劫持ENaC所需的furin蛋白酶，将造成ENaC功能紊乱、失常，这一效果可能与新冠病毒的其它致病因素相互作用、相互叠加，引发更严重或更复杂的症状。

新冠S蛋白与人类ENaC-α共有的RRAR'SVAS序列在（广义）生物界极为罕见，从自然演化的角度看，这一结构巧合是不可思议的，这至少体现在：
1、只有一种冠状病毒的S蛋白含有RRAR'SVAS序列，它就是新冠病毒，即，RRAR'SVAS序列在除新冠外的所有冠状病毒S蛋白中皆不存在（基于论文依据一的冠状病毒S蛋白搜索匹配结果）；
注：RRAR'SVAS序列有可能在其它冠状病毒或非冠状病毒的结构蛋白中都不存在，没有人报告，在何种其它病毒的何种蛋白中也搜索匹配到了这一八氨基酸序列。
2、就人类而言，RRAR'SVAS序列只存在于ENaC-α之中，更具体点说，ENaC-α是aa（amino acid，氨基酸）序列含有RRAR'SVAS的唯一一种人体蛋白结构（基于论文依据一的人类蛋白搜索匹配结果）；
3、ENaC-α含有RRAR'SVAS序列的生物物种仅有六种，其中五种是灵长类动物：人类（human）、黑猩猩（chimpanzee）、倭黑猩猩（bonobo）、猩猩（orangutan）、大猩猩（gorilla），唯一一种ENaC-α含有RRAR'SVAS序列的非人类、非类人猿物种是一种发现于欧洲和西亚的叫作pipistrellus kuhlii的蝙蝠（基于论文依据二的报告）。
4、在新冠病毒近3万个核苷酸（碱基）位点中，RRAR'SVAS序列恰巧出现在对感染、致病能力至关重要的S蛋白S1亚基、S2亚基交界处。

论文依据一：
SARS-CoV-2 strategically mimics proteolytic activation of human ENaC
（SARS-CoV-2策略性地模拟人ENaC的蛋白水解激活）
https://elifesciences.org/articles/58603

论文依据二：
A call for an independent inquiry into the origin of the SARS-CoV-2 virus
（呼吁对SARS-COV-2病毒的起源进行独立调查）
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2202769119

新冠病毒S蛋白与人类ENaC-α共有的，在冠状病毒S蛋白中独一无二的，在生物界极为罕见的，恰巧位于新冠病毒S1、S2亚基交界处的长furin切割序列RRAR'SVAS，是自然演化的产物，还是人为赋予的？

北卡教堂山分校肺研究所

北卡罗来纳大学（UNC）教堂山分校（University of North Carolina at Chapel Hill）有一批长期研究ENaC的分子生物学-生物化学领域顶尖专家，他们所属单位是UNC-at-CH肺研究所/肺研究中心。

北卡罗来纳大学教堂山分校肺研究所/肺研究中心在不同时期名称有所不同，如在2001~2002年的一篇ENaC论文（论文-10）中，其名称为：
Cystic Fibrosis Research and Treatment Center, Department of Medicine, University of North Carolina at Chapel Hill
囊性纤维化研究与治疗中心，医学系，北卡罗来纳大学教堂山分校。

在2008年的一篇ENaC论文（论文-7）中，其名称为：
Cystic Fibrosis/Pulmonary Research and Treatment Center，University of North Carolina at Chapel Hill
囊性纤维化/肺研究和治疗中心，北卡罗来纳大纳教堂山分校。

在2018的一篇ENaC论文（论文-1）中，其名称为：
Marsico Lung Institute, Cystic Fibrosis Center and Department of Medicine, University of North Carolina, Chapel Hill, NC
Marsico肺研究所，囊性纤维化中心和医学系，北卡罗来纳大学教堂山分校。

或许您已经注意到了，北卡肺研究所三个不同时期的全名都包含“囊性纤维化”（CF，Cystic Fibrosis）一词。“囊性纤维化”是一种ENaC变异或机能异常引发的上皮组织疾病，肺泡上皮、呼吸道上皮是CF最常见的发病部位。ENaC是北卡肺研究所的核心研究领域（之一）。

北卡肺研究所对ENaC的研究

北卡教堂山分校肺研究所/肺研究中心在2001年至2018年间发表了相当数量的专门研究ENaC的论文或与ENaC高度相关的论文，下面列举其中的12篇。

论文-1、

2018 Aug 6，Epub 2018 Jul 6（电子版在线发布时间为2018年7月6日，印刷版发行时间为2018 年8月6日）

The N terminus of α-ENaC mediates ENaC cleavage and activation by furin
α-ENaC 的N末端（氨基端）介导弗林蛋白酶对ENaC的切割和激活
https://rupress.org/jgp/article/ ... s-ENaC-cleavage-and
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29980634/

论文-2、

2014 Aug 15，Epub 2014 Jun 28

The N-terminal domain allosterically regulates cleavage and activation of the epithelial sodium channel
N端结构域变构调节上皮钠通道的切割和激活
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)33101-X/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24973914/

该论文由北卡肺研究所与University of Wyoming、Medical College of Wisconsin的有关单位联合发表。

论文-3、

2012 Apr 24，Epub 2012 Apr 9

Energetic and structural basis for activation of the epithelial sodium channel by matriptase
matriptase（基质蛋白酶）激活上皮钠通道的能量和结构基础
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/bi2014773
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3404201/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22471557/

该论文的发表单位除北卡肺研究所外，还包括Hotchkiss Brain Institute, Calgary, AB, Canada.

论文-4、

2012 Jan 15，Epub 2011 Oct 14

Transgenic hCFTR expression fails to correct β-ENaC mouse lung disease
hCFTR转基因表达未能纠正（改善）β-ENaC（结构、机能异常引发的）小鼠肺部疾病
https://journals.physiology.org/ ... /ajplung.00083.2011
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22003093/

CFTR：cystic fibrosis transmembrane conductance regulator，囊性纤维化跨膜传导调节蛋白（调节器、调节剂）。
hCFTR：human CFTR，人类囊性纤维化跨膜传导调节蛋白。
Transgenic hCFTR expression：以hCFTR替换Mouse的相应蛋白。

论文-5、

2010 Oct 15，Epub 2010 Aug 13
The Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Impedes Proteolytic Stimulation of the Epithelial Na+ Channel
囊性纤维化跨膜电导调节剂阻碍上皮Na+通道的蛋白水解刺激
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)47271-0/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20709758/

论文-6、

2010 Aug 27，Epub 2010 Jun 21

Airway surface liquid volume regulation determines different airway phenotypes in liddle compared with betaENaC-overexpressing mice
相比β-ENaC过表达小鼠，对liddle（综合症小鼠或患者）而言，不同的呼吸道表型由呼吸道表面液体容量调节决定。
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)59487-8/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20566636/

论文-7、

2008 Nov 1，Epub 2008 Oct 13

ENaC proteolytic regulation by channel-activating protease 2
通道激活蛋白酶2（CAP2/TMPRSS4）对ENaC的蛋白水解调节
https://rupress.org/jgp/article-lookup/doi/10.1085/jgp.200810030
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18852303/

论文-8、

Published online 1 May 2005，Published in print 1 May 2005，First published January 7, 2005

Neutrophil elastase activates near-silent epithelial Na+ channels and increases airway epithelial Na+ transport
中性粒细胞弹性蛋白酶激活近静默上皮Na+通道并增加气道上皮Na+转运
https://journals.physiology.org/ ... /ajplung.00435.2004
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15640288/

论文-9、

Published online 1 January 2004，Published in print 1 January 2004，First published September 10, 2003

Serine protease activation of near-silent epithelial Na+ channels
丝氨酸蛋白酶激活近静默上皮Na+通道
https://journals.physiology.org/ ... /ajpcell.00342.2003
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12967915/

论文-10、

2002 Mar 8，Epub 2001 Dec 26

Regulation of the epithelial sodium channel by serine proteases in human airways
丝氨酸蛋白酶对人气道中上皮钠通道的调节
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(19)36437-3/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11756432/

以上论文都是专门研究ENaC微观结构与内在机能的分子生物学/生物化学论文；除上述10篇论文外，北卡肺研究所还发表过一些与ENaC高度相关的论文，下面是两个例子（笔者未搜集更多这类论文）：

论文-11、

2006 May，Epub April 24 2006

Soluble Mediators, Not Cilia, Determine Airway Surface Liquid Volume in Normal and Cystic Fibrosis Superficial Airway Epithelia
可溶性介质，而不是纤毛，决定正常和囊性纤维化浅表气道上皮的表面液体体积
https://rupress.org/jgp/article/ ... ia-Determine-Airway
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16636206/

论文-12、

2010 Mar，Epub 2009 Dec 11

Modulation of endocytic trafficking and apical stability of CFTR in primary human airway epithelial cultures
原代人气道上皮培养物中CFTR内吞运输和顶端稳定性的调节
https://journals.physiology.org/ ... /ajplung.00016.2009
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20008117/

分子生物、生物化学界对RRAR'SVAS的认知

2004年Pittsburgh、Texas大学论文

2004 Apr 30（Epub 2004 Mar 7），University of Pittsburgh School of Medicine（匹兹堡大学医学院）、University of Texas Health Science Center（德克萨斯大学健康科学中心）联合发表了如下JBC（Journal of Biological Chemistry）论文：
Epithelial Sodium Channels Are Activated by Furin-dependent Proteolysis
上皮钠通道被弗林蛋白酶依赖性蛋白水解激活
https://www.jbc.org/article/S0021-9258(19)75354-X/fulltext
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15007080/

这篇论文指出了furin蛋白酶对ENaC水解激活的重要性。

论文“Supplementary Material”部分提供了如下文件：
https://www.jbc.org/cms/10.1074/ ... 96df0ee6de/mmc1.pdf

文件标出了几个物种ENaC 的α和γ亚基的所有基本/最小（minmal）furin切割序列。


几个物种ENaC的furin切割序列（ENaC-α部分）

上图是文件截图的上半部分（alpha亚基部分）。由图可见，human ENaC alpha亚基第199-204氨基酸是GARRAR，即第201-204氨基酸为RRAR（图中所有基本furin切割序列RXXR的首尾两个精氨酸皆加黑突出显示）。RRAR也正是新冠病毒S1/S2位点处的基本furin切割序列。

这表明，不晚于2004年，分子生物学、生物化学界就已经知道human ENaC-α的（最后一个）基本furin切割序列是RRAR（另二个基本furin切割序列是RSRR、RDLR）；文件虽未完整展示human ENaC-α的长furin切割序列RRAR'SVAS，但分子生物学家、生物化学家们不会不知道紧随RRAR之后的四个氨基酸是SVAS。

这篇Pittsburgh、Texas大学2004年论文是论文-7（2008 Nov 1 北卡ENaC论文）的参考论文之一，论文-7在涉及furin切割的相关内容中，四次提及这篇论文，并引用论文的有关结论、发现。这篇2004年论文也被论文-1（2018 Aug 6 北卡ENaC论文）、论文-5（2010 Oct 15 北卡ENaC论文）、论文-8（1 May 2005北卡ENaC论文）列为参考论文。

2007~2008年Pittsburgh、Tennessee大学论文

01 Jan 2008（Epub 2007 Nov 21），University of Pittsburgh、University of Tennessee 联合发表了如下论文：
Defining an inhibitory domain in the α-subunit of the epithelial sodium channel
在上皮钠通道的α亚基中定义抑制域
https://journals.physiology.org/ ... ajprenal.00399.2007
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18032549/


下面是论文的Fig. 5（笔者加了若干标记方框）


Fig. 5部分哺乳动物α-ENaC的furin切割序列

在Fig. 5中，α-ENaC包含“RRAR”切割序列的物种有四种：Oryctolagus cuniculus（穴兔或家兔）、Homo sapiens（智人或人类）、Canis familiaris（犬类）、Cavia porcellus（豚鼠）。

（注：按图中所标的氨基酸序号，Homo sapiens的α-ENaC的RRAR序列为第202-205氨基酸，而在上一个图中，human ENaC alpha的RRAR序列为第201-204氨基酸，二者有一个序号错位。）

Fig. 5也未展示RRAR之后的氨基酸。

哥伦比亚大学杰弗里·萨克斯教授（Jeffrey D. Sachs）、尼尔·哈里森（Neil L. Harrison）教授2022年5月19日发表的PNAS(Proceedings of National Academy of Sciences，美国国家科学院院刊)文章：
A call for an independent inquiry into the origin of the SARS-CoV-2 virus
（呼吁对SARS-COV-2病毒的起源进行独立调查）
https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2202769119

包含以下内容：
The FCS of human ENaC α has the amino acid sequence RRAR'SVAS (Fig. 2), an eight–amino-acid sequence that is perfectly identical with the FCS of SARS-CoV-2 (16).
...
The FCS sequence of human ENaC α (20) is identical in chimpanzee, bonobo, orangutan, and gorilla (SI Appendix, Fig. 1), but diverges in all other species, even primates, except one. (The one non-human non-great ape species with the same sequence is Pipistrellus kuhlii, a bat species found in Europe and Western Asia;
...
人类ENaC α的FCS（furin cleavage site，furin切割位点）具有氨基酸序列RRAR'SVAS，这一八氨基酸序列与SARS-CoV-2的FCS（序列）完全相同。
。。。

人类ENaC α 的FCS序列（指RRAR'SVAS）与黑猩猩、矮黑猩猩、猩猩和大猩猩相同，但与所有其它物种，甚至其它灵长类动物都不相同，除了一个例外。（这一非人类、非类人猿类的具有相同序列的唯一例外物种是Pipistrellus kuhlii，一种发现于欧洲和西亚的蝙蝠；
。。。

由以上内容可知，ENaC-α含有RRAR'SVAS序列的物种仅有六种：人类（human）、黑猩猩（chimpanzee）、倭黑猩猩（bonobo）、猩猩（orangutan）、大猩猩（gorilla）、Pipistrellus kuhlii蝙蝠。

进而可知，在Fig. 5中，除Homo sapiens（智人或人类）外，其它三个ENaC-α含有基本furin切割序列RRAR的物种（Oryctolagus cuniculus、Canis familiaris、Cavia porcellus），其RRAR之后的四个氨基酸不会是SVAS。

2007~2008年的Pittsburgh大学、Tennessee大学论文再次表明，人类ENaC-α的furin切割序列是分子生物学界、生物化学界的一个“常识”，而且，分子生物学家、生物化学家们经常比对human、各物种ENaC的furin切割序列。

2016年Israel Ariel、Tel-Aviv大学论文

2016 Apr 1（Epub 2016 Jan 7）， Israel Ariel University、Tel-Aviv University的两位科学家发表了如下论文：
Epithelial sodium channel (ENaC) family Phylogeny, structure-function, tissue distribution, and associated inherited diseases
上皮钠通道（ENaC）家族系统发育、结构-功能、组织分布，以及相关遗传疾病
https://www.sciencedirect.com/sc ... i/S0378111915015735
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4756657/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26772908/

论文Fig. 11的α亚基部分如下：


Fig. 11 20个物种胞外域的丝氨酸蛋白酶切割位点（ENaC-α部分）

（注：furin蛋白酶是一种前体蛋白转化酶，而前体蛋白转化酶又是丝氨酸蛋白酶大家族中的一个子类。简而言之，furin蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶；Fig. 11还涉及另一种丝氨酸蛋白酶，胰蛋白酶-Trypsin，它以单个的精氨酸-R为切割位点。）

在Fig. 11所列20个物种中，ENaC-α包含RRAR'SVAS序列的是前三个物种（human-人类，chimpanzee-黑猩猩，Gorilla-大猩猩）。

（注：按Fig. 11所标的氨基酸序号，RRAR'SVAS序列是human ENaC-α的第208-215氨基酸，而不是前文所说的第201-208氨基酸。笔者猜测，该论文对human ENaC-α起始氨基酸的定义可能与前面几篇相关论文不同。）

由上述三篇论文可知，分子生物学、生物化学界早就知道，非常清楚人类ENaC-α的长furin切割序列RRAR'SVAS。

新冠病毒S蛋白与人类ENaC-α共有的，在冠状病毒S蛋白中独一无二的，在生物界极为罕见的，恰巧位于S蛋白S1/S2位点处的长furin切割序列RRAR'SVAS，是自然演化的产物，还是人为设计、赋予的？

新冠病毒是专为人类设计的。

谁将人类ENaC-α的长furin切割序列RRAR'SVAS引入到了新冠病毒S蛋白S1亚基、S2亚基交界处？是分子生物学家、生物化学家？是北卡肺研究所？谁才是新冠病毒的核心设计者？

（未完待续）